Anti PEG 抗体（聚乙二醇抗体）常见问题解答

PEG 抗体

公司简介：

Anti PEG由中国台湾中央研究院生物医学科学研究所创立。因此，公司的抗体有时被称为"中研院"抗聚乙二醇抗体。中央研究院成立于1928年，至今仍是中国台湾顶尖的研究机构之一。

1999年，Anti PEG道了具有聚乙二醇特异性识别的单克隆抗体E11与AGP3（《生物共轭化学》10:520-528,1999）。其中AGP3抗体被成功应用于聚乙二醇化干扰素α-2a（商品名派罗欣®）的加速开发（《生物共轭化学》12:195-202,2001；《专家意见-药物递送》6:1-16,2009）。

迄今公司已开发出系列抗PEG单克隆抗体，被全球280余所大学及国际制药/生物技术公司用于聚乙二醇化药物的分析与开发。

产品包括：

• 聚乙二醇化化合物与纳米颗粒的定量检测

• 靶向递送PEG化纳米载体的双特异性抗体开发

• 人源抗PEG抗体制备

• 人体内抗PEG抗体的检测分析

产品描述：

聚乙二醇（PEG）是一种水溶性、无毒且生物相容性良好的聚合物。将PEG链与蛋白质结合可降低其免疫原性、减少蛋白酶水解并延长血清半衰期。PEG修饰技术还广泛应用于小分子药物和脂质体的靶向递送系统，通过对超顺磁性氧化铁颗粒和量子点的PEG化修饰，可显著改善其生物相容性并降低非特异性摄取。

为实现PEG化化合物的高灵敏度检测，Anti PEG研发出PEG特异性单克隆抗体AGP3。迄今已开发出系列抗PEG IgG/IgM单克隆抗体，适用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术（FACS）、免疫组化（IHC）及细胞分选等检测平台。

产品订购：

Anti PEG 抗体常见问题解答（FAO）

1．什么是抗PEG抗体？

Anti PEG公司抗PEG抗体（AGP3、AGP4、E11、3.3和6.3） 是小鼠单克隆抗体，可特异性结合聚乙二醇（PEG）聚合物中的重复单元。这些抗体能够识别任何末端结构或连接方式的PEG（包括甲氧基PEG），适用于PEG化分子（如PEG化蛋白、颗粒及脂质体）的检测与分析。

此外，公司还提供一种靶向mPEG末端甲氧基的单克隆抗体（15-2b）。近期公司开发新开发了一种具有温度选择性的抗PEG单克隆抗体（2B5），其能够可逆地结合PEG，且结合活性随温度变化而调节。

2．抗体的抗体亚型是什么？

AGP3与AGP4为IgM型抗体，需使用抗IgM二抗进行检测；其余抗体（包括E11、3.3、6.3、2B5及15-1b）均属IgG1亚型。

3.抗体的动物来源是什么？

抗体为小鼠来源，检测时请使用对应的抗小鼠二抗。

4.抗体中是否已加了防腐剂？

抗体中添加0.02%NaN3作为防腐剂。如需无防腐剂抗体，可接受特殊订单定制（无需额外费用）。所有抗体产品均经过滤除菌处理。

5.抗体是否家里载体蛋白。

无。

6. 抗体产品的储存缓冲液成分是什么？

抗体以PBS缓冲液（含0.14 M NaCl、2.7 mM KCl、1.5 mM KH2PO4、8.1 mM Na2HPO4）形式运输。对于生物素化抗体或非干冰运输的抗体，我们将添加50%甘油作为保护剂。

7.抗体应该如何保存？

抗体保存指南：

1）50%甘油保存的抗体：可长期保存于-20℃

2）干冰运输的抗体：建议保存于-80℃

使用时，请分装为工作用量后冻存于-80℃（或-20℃）。未污染微生物时，4℃可稳定保存数月。可额外添加50%甘油，于-20℃保存至少1年

禁止以下操作：

1）储存前稀释抗体。 2）反复冻融抗体。

8.抗体可以保存多久？

未稀释的抗体在-80℃条件下可稳定保存至少3年；若添加50%甘油并于-20℃保存，则有效期至少为1年。

9. 这些抗体结合部位在哪里？

多数抗PEG抗体可结合聚乙二醇（PEG）聚合物中的重复单元，其最小结合域因抗体而异。例如：

3.3抗体：无法结合分子量＜750 Da的PEG分子

6.3抗体：可识别更小的抗原表位

AGP4抗体：结合表位最小（仅需4个环氧乙烷单元构成的PEG4）

抗体按识别表位大小排序（从大到小）：

3.3 > AGP3 > E11 > 6.3 > AGP4

特别说明：

15-2b抗体不结合PEG主链，仅特异性识别mPEG末端的甲氧基。

10. 这些抗体能否结合游离（未偶联）的PEG分子？

1）可检测情况：

只要PEG分子处于"固定化"状态，这些抗体即可与之结合。例如：

氨基末端PEG：可吸附于ELISA板，抗体对其显示强结合力

其他固定化形式：

• 免疫组化切片中的PEG

• 硝酸纤维素膜上的PEG

最佳结合对象：与蛋白质、脂质体、细胞及纳米颗粒物理结合的PEG

2）不可检测情况：

溶液中的游离PEG链仅被抗体低亲和力结合，因此：ELISA检测游离PEG灵敏度较低，未偶联PEG不会干扰检测实验。

解决方案：

如需检测游离PEG浓度，建议采用我们新开发的细胞检测系统。

11.该抗体能否识别支链PEG及长链PEG？

1)支链PEG（branched chain PEG）：

可结合，但亲和力取决于分支点结构（需实验验证）

2)长链PEG（long PEG）：

• 分子量＞1,000 Da：强结合（依赖重复单元表位）

• 分子量＜750 Da：参见抗体特异性列表（如3.3抗体不结合）

12. 末端基团或连接臂是否会影响抗体的结合？

本公司的抗PEG抗体（AGP3、AGP4、E11、3.3、2B5及6.3）均靶向PEG骨架结构，其结合活性不受偶联技术或末端基团影响；而15-2b抗体则特异性识别部分PEG分子（mPEG）末端的甲氧基。

13.这些抗体能否用于血清样本中PEG化化合物的检测?

可以！经实验验证，血清基质不会显著影响本公司抗PEG抗体与PEG化化合物的结合效能。

14. Tween-20是否会干扰抗体的结合活性？

1）6.3抗体：

严禁使用Tween-20（会显著影响结合活性）

2）其他抗体（AGP3/E11/3.3/15-2b）：

可安全用于ELISA检测（推荐浓度≤0.05%）

科学依据：所识别的表位大于Tween-20的PEG连接区

替代方案：

可使用CHAPS替代Tween-20

3）特殊案例（AGP4）：

虽识别小表位，但因IgM抗体的高亲合力，Tween-20无显著影响

15. ELISA检测应如何选择抗体？

捕获抗体：推荐使用 AGP4，包被浓度：0.25 μg/孔（96孔板）

检测抗体（生物素标记）：可选：AGP3-biotin、3.3-biotin 或 AGP4-biotin，选择：3.3-biotin（通常表现较好）

信号检测系统：链霉亲和素-HRP（推荐使用Jackson Laboratories的SA-HRP）

16. 抗PEG ELISA可检测哪些类型的分子？

经我们及同行验证的可检测分子包括（但不限于）：多种PEG修饰蛋白、PEG修饰脂质体、PEG修饰纳米点及PEG化纳米颗粒。

17．抗体的检测灵敏度是多少？

检测限与待测物类型高度相关：

• PEG化量子点：~1 pM（夹心法检测）

• 脂质体药物（如Lipodox®）：1 ng/mL

• PEG化蛋白（如Pegasys®）：1 ng/mL

18.有没有标准的PEG抗体ELISA检测流程？

是的，具体流程咨询Anti –PEG中国区授权总代理北京博蕾德生物科技有限公司。

19. 能否使用AGP3同时作为包被抗体和检测抗体？

不可以。

原因如下：

背景干扰机制：

当加入二抗（抗IgM或抗Ig偶联物）时，其会与包被在板上的AGP3结合，导致持续高背景信号

推荐方案：
► 检测体系：

包被抗体：AGP3 或 AGP4

·       检测抗体：AGP3-biotin/AGP4-biotin/3.3-biotin

·       信号系统：链霉亲和素-HRP（SA-HRP）

※ 此组合适用于所有PEG化化合物的检测

20．能否用低浓度抗体作为包被或检测抗体？

是的，但当AGP3用作捕获抗体时，检测灵敏度会降低。然而，AGP4的量可以减少到0.25mg/孔，对测定灵敏度的影响很小。  

21. 可以预先混合生物素和链霉抗生物素蛋白检测试剂吗？

可以，强烈建议在将AGP3生物素或AGP4生物素加入ELISA板之前，将其与链霉抗生物素蛋白-HRP预混合。通常通过预混合来提高检测灵敏度（见下文数据）。检测时间也缩短了。

22.有没有其他客户使用过这些抗体？

是的，全球已有逾100家制药与生物技术公司采购并使用本公司的抗PEG抗体。

23.如何订购Anti-PEG 公司抗体？

请通过Anti-PEG授权中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司订购。

更多产品咨询，请垂询Anti-PEG授权中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司