Lumafluor RetroBeads™逆行荧光示踪剂

RetroBeads™逆行荧光示踪剂

产品描述：

Lumafluor公司 RetroBeads™ 是逆向示踪领域的原装微球，也是经实验验证高效可靠的微球产品。绿色和红色荧光 RetroBeads™ 仅由 Lumafluor 供应。稳定、可靠的逆向示踪，唯有Lumafluor RetroBeads™ 是您的优选。

Lumafluor RetroBeads™ 核心优势：

1）高度精准注射—特别适用于精细神经连接研究

2）胞内长期稳定存在（> 1年）且无毒副作用

3）兼容性强：可与多数顺行示踪剂、原位杂交及免疫组化技术联用

操作流程：

【产品说明】

1.包装形式：蒸馏水悬浮浓缩液。

2.红色微球：

1）可直接使用或稀释。

2）大鼠视觉皮层实验显示1:4稀释不影响标记效果。

3）初次实验建议使用原液。

4）可用蒸馏水或标准盐溶液（NaCl/KCl）稀释。

3.绿色微球

1）即用型制剂

2）禁止稀释

【储存条件】

1.冷藏保存于加湿容器中（防蒸发）

2.严禁冷冻（会导致持久性失效）

3.干燥后不可复溶

4.正确储存条件下有效期可达数年

【注射方法】

1.推荐方式：

1）压力注射（如1mL汉密尔顿注射器）

2）局部神经环路：30-50纳升（30-50μm玻璃微量注射器）

3）常规逆行示踪：0.1-0.3微升（大口径针头）

2.扩散特性：

1）注射点扩散范围<1mm

2）大范围标记需多点注射

3）不推荐电离子透入法（微珠带净负电荷）

【存活时间】

1.温血脊椎动物：

1）最短有效标记时间：24小时

2）48小时内标记强度递增，此后保持稳定。

2.冷血动物：建议初始存活时间设为1周。

3.最长存活期：未明确，但14个月后标记仍稳定，推测为持久性标记。

4.无毒性：未发现对动物或神经元的毒性效应。

【固定与处理】

1.标准固定流程：

1）0.1 M磷酸缓冲液冲洗

2）4%多聚甲醛（0.1 M磷酸缓冲液，pH 7.4）固定

2.避免戊二醛：会引发组织自发荧光，干扰标记（绿色微球在戊二醛固定后不可见）。

3.切片处理：

1）冰冻切片收集于磷酸缓冲液，贴附于明胶包被载玻片，空气干燥。

2）充分干燥后，二甲苯透明1分钟，封片（推荐Fluoromount或Krystalon）。

4.注意事项：

1）短时间（<5分钟）接触酒精或二甲苯无害，但长时间会破坏微球。

2）严禁甘油：微球对甘油敏感，会快速褪色（可改用水杨酸甲酯）。

3）避光保存时，标记可稳定1年以上（但背景荧光可能增强）。

4）塑料包埋后无法保留标记。

【观察方法】

1.红色微球：

染料为罗丹明，适用任何罗丹明荧光滤光片（部分旧款尼康滤光片背景较高，推荐蔡司或徕卡标准滤光片）。

2.绿色微球：

适用宽波段荧光素滤光片（窄波段信号较弱，Lucifer Yellow滤光片背景较高）。

3.抗光漂白：长时间观察或显微摄影无明显褪色。

4.镜头选择：

1）低倍干镜（如4×、10×）通常无法清晰观察标记。

2）推荐使用10×油镜（NA ≥ 0.4）或更高倍镜，25×油镜可显著提升绿色微球标记的清晰度。

3）实验失败判断前，请用油镜检查注射位点附近切片（应存在大量局部标记细胞）。

绿色微球特别提示

1.年龄影响：

幼年动物标记转运效率更高，组织自发荧光更低，建议优先选用。

2.降低自发荧光：

1）使用更薄切片（如30 μm而非40-50 μm）。

2）选用幼年动物。

3）封片后尽快观察（背景荧光随时间增强）。

产品订购：

更多产品信息，请垂询Lumafluor中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司。