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WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)模型诱导方案

更新时间:2025-08-21点击次数:26

WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)模型诱导方案

WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)模型诱导方案

简介:

Goodpasture's syndrome综合征是一种自身免疫性疾病,可引发急进性肾小球(RPDN)和肺出血,其发病机制由针对肾小球和肺泡基底膜的自身抗体介导。IV型胶原作为肾小球基底膜(GBM)的主要成分,由五条α(IV)[a1(IV)a5(IV)]构成。其中IV型胶原a3链的非胶原结构域(a3(IV)NC1)被确认为人类Goodpasture's syndrome综合征的主要抗原。

实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)作为该综合征的临床模型,可通过以下抗原在Wistar KyotoWKY)大鼠中诱导:1)异源/同源GBM 2)IV型胶原NC1片段 3)纯化牛源α3(IV)NC1 4)重组人源α3(IV)NC1及α4(IV)NC1 5)人源α3(IV)NC1合成肽段

研究证实,大鼠的Goodpasture's syndrome综合征抗原定位于α3(IV)NC1和α4(IV)NC1EAG还可通过转移肾病WKY大鼠的自身抗体或α3(IV)NC1肽段特异性T细胞诱导于正常WKY大鼠,表明抗GBM抗体与抗原特异性T细胞在EAG发病机制中具有独立作用。

Chondrex公司提供的牛源IV型胶原NC1片段(货号11021mg)源自胶原酶溶解的牛GBM,可作为诱导WKY大鼠EAG的抗原之一。同时提供:

1)大鼠尿蛋白检测试剂盒(货号9040):用于EAG模型16小时尿总蛋白定量。

2BPB蛋白检测试剂盒(货号6026):蛋白尿评估。

3)肌酐检测试剂盒(货号6041):用于蛋白尿/白蛋白尿数据的标准化校正。

EAG模型诱导方案:

1.实验动物

选用7-8周龄或更年长的WKY大鼠。需注意:不同亚系、供应商或饲养设施来源的WKY大鼠对EAG的敏感性存在差异。

2.抗原制备

1IV型胶原NC1片段(货号11021mg)溶解于1ml 0.05M磷酸盐缓冲液(PBSpH7.4)中,配制成1mg/ml溶液。

3.乳化处理

将等体积的NC1片段溶液与CFA弗氏佐剂(货号7008,含1mg/ml结核分枝杆菌)混合乳化。

注意事项:乳化稳定性检测:取1滴乳化液滴入烧杯水中。

合格标准:乳化液保持完整团块状浮于水面不分散。

不合格处理:若乳化液在水面扩散,需补加数滴佐剂重新乳化。

4. 免疫接种

初次免疫:于大鼠尾根部皮下注射0.2ml乳剂(含0.1mg NC1片段)

加强免疫(适用于低反应性大鼠):第7天,改用IFA弗氏佐剂(货号7008)制备乳剂

剂量与部位同初次免疫。

注意:

不同供应商来源的同一品系大鼠对肾炎易感性存在差异,研究者需根据实际情况优化免疫方案(包括免疫周期和剂量)

5. EAG模型评估

观察周期:建议持续观察至第35天。

检测方法

每周进行16小时蛋白尿检测(推荐使用Chondrex大鼠尿蛋白检测试剂盒,货号9040)。

典型病程:易感WKY大鼠通常在14-21天出现蛋白尿,21-28天达到蛋白尿峰值。

WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)模型诱导方案

牛源NC1片段免疫诱导的WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎

7 周龄雌性 WKY 大鼠,于第 0 天经尾根部皮下注射 100μg 牛源 NC1 片段(cat# 1102)与CFA弗氏佐剂(CFAcat#7008,含 1 mg/ml 结核分枝杆菌)的乳化液。实验大鼠于第 10天出现蛋白尿,并持续至第 28 天。

相关产品信息:

品牌

货号

产品名称

中文名称

规格

Chondrex

1102

NC1 Fragment of Bovine GBM Type IV   Collagen

牛肾小球基底膜IV型胶原NC1片段

1mg

Chondrex

7008

CFA

CFA弗氏佐剂(1mg/ml)

5ml

Chondrex

9040

Rat Urinary Protein Assay Kit

大鼠尿蛋白检测试剂盒

1Kit

Chondrex

6026

Bromophenol   Blue (BPB) Protein Assay Kit

溴酚蓝(BPB)蛋白检测试剂盒

1Kit

Chondrex

6041

Creatinine Assay Kit

肌酐检测试剂盒

1Kit

更多EAG模型诱导相关产品和支持,请垂询Chondrex中国区总代理北京博蕾生物科技有限公司。



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