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WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)模型诱导方案
简介:
Goodpasture's syndrome综合征是一种自身免疫性疾病,可引发急进性肾小球(RPDN)和肺出血,其发病机制由针对肾小球和肺泡基底膜的自身抗体介导。IV型胶原作为肾小球基底膜(GBM)的主要成分,由五条α(IV)链[a1(IV)至a5(IV)]构成。其中IV型胶原a3链的非胶原结构域(a3(IV)NC1)被确认为人类Goodpasture's syndrome综合征的主要抗原。
实验性自身免疫性肾小球肾炎(EAG)作为该综合征的临床模型,可通过以下抗原在Wistar Kyoto(WKY)大鼠中诱导:1)异源/同源GBM 2)IV型胶原NC1片段 3)纯化牛源α3(IV)NC1 4)重组人源α3(IV)NC1及α4(IV)NC1 5)人源α3(IV)NC1合成肽段
研究证实,大鼠的Goodpasture's syndrome综合征抗原定位于α3(IV)NC1和α4(IV)NC1。EAG还可通过转移肾病WKY大鼠的自身抗体或α3(IV)NC1肽段特异性T细胞诱导于正常WKY大鼠,表明抗GBM抗体与抗原特异性T细胞在EAG发病机制中具有独立作用。
Chondrex公司提供的牛源IV型胶原NC1片段(货号1102,1mg)源自胶原酶溶解的牛GBM,可作为诱导WKY大鼠EAG的抗原之一。同时提供:
1)大鼠尿蛋白检测试剂盒(货号9040):用于EAG模型16小时尿总蛋白定量。
2)BPB蛋白检测试剂盒(货号6026):蛋白尿评估。
3)肌酐检测试剂盒(货号6041):用于蛋白尿/白蛋白尿数据的标准化校正。
EAG模型诱导方案:
1.实验动物
选用7-8周龄或更年长的WKY大鼠。需注意:不同亚系、供应商或饲养设施来源的WKY大鼠对EAG的敏感性存在差异。
2.抗原制备
将1瓶IV型胶原NC1片段(货号1102,1mg)溶解于1ml 0.05M磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)中,配制成1mg/ml溶液。
3.乳化处理
将等体积的NC1片段溶液与CFA弗氏佐剂(货号7008,含1mg/ml结核分枝杆菌)混合乳化。
注意事项:乳化稳定性检测:取1滴乳化液滴入烧杯水中。
合格标准:乳化液保持完整团块状浮于水面不分散。
不合格处理:若乳化液在水面扩散,需补加数滴佐剂重新乳化。
4. 免疫接种
初次免疫:于大鼠尾根部皮下注射0.2ml乳剂(含0.1mg NC1片段)
加强免疫(适用于低反应性大鼠):第7天,改用IFA弗氏佐剂(货号7008)制备乳剂
剂量与部位同初次免疫。
注意:
不同供应商来源的同一品系大鼠对肾炎易感性存在差异,研究者需根据实际情况优化免疫方案(包括免疫周期和剂量)
5. EAG模型评估
观察周期:建议持续观察至第35天。
检测方法:
每周进行16小时蛋白尿检测(推荐使用Chondrex大鼠尿蛋白检测试剂盒,货号9040)。
典型病程:易感WKY大鼠通常在14-21天出现蛋白尿,21-28天达到蛋白尿峰值。
牛源NC1片段免疫诱导的WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎
7 周龄雌性 WKY 大鼠,于第 0 天经尾根部皮下注射 100μg 牛源 NC1 片段(cat#号 1102)与CFA弗氏佐剂(CFA,cat#7008,含 1 mg/ml 结核分枝杆菌)的乳化液。实验大鼠于第 10天出现蛋白尿,并持续至第 28 天。
相关产品信息:
品牌 | 货号 | 产品名称 | 中文名称 | 规格 |
Chondrex | 1102 | NC1 Fragment of Bovine GBM Type IV Collagen | 牛肾小球基底膜IV型胶原NC1片段 | 1mg |
Chondrex | 7008 | CFA | CFA弗氏佐剂(1mg/ml) | 5ml |
Chondrex | 9040 | Rat Urinary Protein Assay Kit | 大鼠尿蛋白检测试剂盒 | 1Kit |
Chondrex | 6026 | Bromophenol Blue (BPB) Protein Assay Kit | 溴酚蓝(BPB)蛋白检测试剂盒 | 1Kit |
Chondrex | 6041 | Creatinine Assay Kit | 肌酐检测试剂盒 | 1Kit |
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