大鼠抗肾小球基底膜肾炎模型制备方案

大鼠抗肾小球基底膜肾炎模型制备方案

简介：

    自身免疫介导的肾炎，目前已发展出三类动物模型。其一是被动型大鼠肾炎模型，称为Masugi 肾炎或肾毒性肾炎，通过给大鼠注射异源性抗肾小球基底膜血清（如兔抗大鼠GBM血清）诱导产生。其二是Steblay肾炎模型，通过使用CFA弗氏佐剂乳化的异源或同源GBM抗原主动免疫绵羊、豚鼠、兔和大鼠等动物来诱导。其三是通过将肾炎大鼠尿液中纯化的抗体转移至健康大鼠体内而建立的大鼠肾炎模型，该模型证明自体抗体可诱发严重肾炎。由于试剂制备过程较为复杂，这些重要动物模型的应用受到一定限制。由此可见，针对自体GBM的单克隆抗体成为在大鼠中诱导肾炎的极为重要且实用的工具。

Goodpasture syndrome综合征是一种由针对肾脏和肺中肾小球基底膜（GBM）的自身抗体引发的自身免疫性疾病，表现为严重的肾脏疾病和肺出血。患者的自身抗体识别构成GBM的IV型胶原蛋白α链（α1-α6）的非胶原结构域（NC1）。更具体地说，主要的人Goodpasture syndrome抗原被确定为IV型胶原蛋白α3链的NC1结构域[α3(IV)NC1] ，并在多个动物模型中得到证实 。此外，Kohda等人报道，通过用重组α4(IV)NC1片段免疫Wistar Kyoto（WKY）大鼠，或注射抗α4(IV)NC1抗体，可在大鼠中诱发该疾病 。

      Chondrex公司提供三种针对大鼠肾小球基底膜（GBM）α4(IV)NC1结构域的大鼠单克隆抗体，通过单次腹腔或静脉注射即可在Wistar-Kyoto大鼠中诱发肾炎。

1） 单克隆抗体b35（IgG2b亚型）：可诱发伴有血尿和肺出血的严重肾炎。

2） 单克隆抗体a84（IgG2a亚型）：可诱发伴有血尿的严重肾炎

3） 单克隆抗体114（IgG1亚型）：在与b35和a84相同剂量下仅诱发轻度肾炎。

免疫方案：

通过对高反应性大鼠品系单次静脉或腹腔注射单克隆抗体，可在剂量依赖性条件下诱发伴有或不伴肺出血的肾炎（图1与图2）。虽然极低剂量单克隆抗体即可在高反应品系中诱发肾炎（b35：1-3ug/只；a84：3-10ug/只；114：>30ug/只），但为稳定诱导肾炎，建议每只大鼠注射100-300ug抗体。

注射单克隆抗体（100ug/只）后2-3天内，16小时尿液收集期（晚6点至次日上午9点）的总尿蛋白量即开始上升，第8-10天达到峰值，并可持续维持高位达22天（图3） 。

单克隆抗体b35以300ug/只的剂量可同时诱发蛋白尿、血尿及严重肺出血；同剂量a84抗体亦可诱发蛋白尿和血尿。而114抗体虽能像b35和a84一样与GBM结合，但在相同剂量范围内仅诱发轻度肾炎且不伴血尿。

注： 即使在较低剂量（10微克）下，a84与b35抗体仍可在WKY/NCrlCrlj大鼠中诱发中度至重度蛋白尿，且该症状可持续22天。然而，接受10微克114抗体的WKY/NCrlCrlj大鼠，其尿蛋白量在第8天达到峰值后，于第12天开始下降。

注：b35在肺部引发了严重的肺出血，而a84引发的肺出血程度较轻。相比之下，114未引起明显的出血

病理检测：

在高反应性大鼠体内注射致肾炎单克隆抗体后，可观察到显著的肾脏组织学改变。例如，b35（每只大鼠300 μg）在第12天诱导了98%的肾小球出现以下病变：肾小球增大伴严重的毛细血管内细胞增生，以及毛细血管外改变（包括囊壁粘连和新月体形成）（图4）。类似地，a84（每只大鼠300 μg）在大鼠75%的肾小球中引发了严重的毛细血管内细胞增生及囊壁粘连、新月体形成等毛细血管外改变。相比之下，114（300 μg）仅在大鼠7%的肾小球中引起轻度的毛细血管内细胞增生性改变及小范围囊壁粘连。

Fig.5 在高反应性大鼠品系中，单克隆抗体于肾小球基底膜（GBM）和肾小管基底膜（TBM）的沉积呈剂量依赖性。在低剂量单克隆抗体（114：100μg，a84：10μg，b35：10 μg）作用下，可观察到沿GBM的线性沉积（图左）。然而，当a84和b35的剂量较高（超过100μg）时，会进一步出现抗体在TBM上的沉积。图右展示了注射b35（100μg）大鼠的GBM与TBM抗体沉积情况，该剂量曾引发严重的肺出血。

产品信息：

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