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试剂解析丨细胞旁通透性定量示踪工具——荧光标记葡聚糖
更新时间：2026-10-28
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维持选择性通透能力，是肠道上皮、血脑屏障、血管内皮等生物屏障生理功能的基础。
紧密连接（TJs）是实现这种选择通透性的核心结构，它形成连续的细胞间封闭结构，调控细胞旁通路（相邻细胞之间的间隙）。
Chondrex™ 荧光标记葡聚糖系列，作为示踪探针，常用于体外/内细胞旁通透性定量检测，评估TJs的完整性。
图1 FITC-Dextran示踪检测细胞旁通透性
（图源Wippersteg V et al., 2003）
一、通透性检测
荧光标记葡聚糖（Fluorescent Labeled Dextrans）：是亲水性、无细胞毒性物质，不会主动跨细胞转运，只从细胞之间的缝隙（细胞旁通路）穿过，因而被广泛用作细胞旁通路示踪标志物。
葡聚糖的通透程度直接反映屏障渗漏的程度、缝隙孔径的大小，通过计算葡聚糖的表观渗透系数实现通透能力定量。
不同货号适用场景：
4013：检测屏障完整性的细微改变、微小孔道开放，屏障评价：TJs轻度损伤；
4009/4014：模拟大分子物质跨屏障移动，屏障评价：TJs明显受损；
FITC是绿色荧光，TRITC是红色荧光，支持双色共标实验。
⚠注意：4013和4009不能混合使用，波长一致，信号无法区分；可(4013或4009)+4014组合。
图2 4013和4009屏障通透性对比（图源Lim JH et al., 2026）
二、体外屏障模型构建基础
紧密连接（TJs）：复杂蛋白复合体——包含闭合蛋白（occludin）、封闭蛋白（claudin）等跨膜整合蛋白，以及闭锁小带（zonula occludens）等胞质辅助蛋白。
Transwell小室体系：屏障通透性研究重要的工具，能构建可靠体外模型，模拟复杂生物屏障。
Transwell核心优势：独特的双腔室结构，支持细胞生长形成极化单层，能够建立极化细胞模型，高度模拟体内生理状态。
图3 Transwell体外肾小管上皮屏障模型
（图源Lim JH et al., 2026）
三、体外实验
Transwell构建：细胞接种于插入式小室多孔膜上，分化形成顶侧（上室）、基底侧（下室）两个不同的细胞表面；支持双向转运实验。
细胞旁通透性检测：在Transwell供体小室加入荧光标记葡聚糖，在设定时间点从接收小室取样，计算物质跨屏障的转运速率。
● 肠道上皮细胞 Caco-2
1、24孔Transwell小室（孔径0.4µm），接种Caco-2，密度2×10⁵ cells/cm²；
2、DMEM培养基，添加10%胎牛血清、非必需氨基酸；持续培养21天，使细胞完成分化与极化，形成刷状缘；
3、HBSS缓冲液清洗小室；顶侧加入终浓度1mg/mL的4013或4009，在30min、60 min、90 min、120 min时间点，收集基底侧样本；
4、酶标仪检测荧光强度，计算表观渗透系数。
图4 Caco-2细胞 Transwell 体外肠道屏障模型
（图源 Ding et al., 2020）
● 血脑屏障细胞 hCMEC/D3
1、Transwell小室（孔径3.0 µm），预先包被5 mg/mL I型胶原；
2、接种hCMEC/D3，密度2.5×10⁵ cells/cm²；EBM2培养基培养7天至细胞充分融合；
3、造模：10 ng/mL TNF-α刺激24 h，破坏屏障，升高通透性；
4、上室替换为含有1 mg/mL 4013的HBSS；37 ℃温和震荡孵育1h;
5、收集下室样本，检测荧光强度，计算示踪分子跨膜转运量。
● 人脐静脉内皮细胞 HUVEC
1、细胞种植在微流控芯片内纤维蛋白/胶原凝胶基质上，模拟生理剪切力，常用于炎症、血管新生研究，代表外周血管；
2、依靠平行流微流控体系建立4009稳定浓度梯度；使用共聚焦显微镜实时追踪示踪物跨内皮向外基质扩散；
3、将通透性动力学与炎症状态下细胞形态重塑进行数学关联分析。
● 标准品溶液配制
注意：标准品稀释液和样本的血浆-PBS配比需一致！推荐稀释浓度：0.2–12.5 μg/mL
1、取10μL原液（25mg/mL）+ 990μL PBS，配成250μg/mL中间液；
2、取12.5μL上述中间液+ 237.5 μL [33%小鼠血浆-PBS稀释液]，得到12.5μg/mL；
3、取125μL上述溶液，加入等体积[33%小鼠血浆PBS稀释液]，得到6.25μg/mL；
4、重复对半继续稀释5次，依次得到3.13、1.56、0.78、0.39、0.2μg/mL系列标准品。
四、体内实验
1、按上述方法配制标准品溶液；
2、小鼠灌胃给药前禁食4 h，实验全程保持禁食；
3、灌胃给4014 : 10 mL/kg体重；
4、继续禁食，等待3 h（可根据动物品系微调时间）；
5、眼眶后静脉丛采血，离心获取血浆；血浆用PBS按1:2（或更高比例）稀释。
图5 小鼠体内 FITC-Dextran肠道通透性检测流程
五、数据计算与评估
将50μL或100μL的标准品、样本加到黑色96孔板，分别读取荧光强度值（FI）；所有标准、样本荧光值减去空白33%正常小鼠血浆0.05M PBS的FI，得到校正后的FI；
建立标准曲线：以标准品浓度为X轴，校正后的标准品FI为Y轴，以双对数作散点图；
将样品测得的FI换算成穿过细胞单层的葡聚糖质量；
计算葡聚糖跨单层细胞的表观渗透系数。
图6 FITC-Dextran荧光定量标准曲线
（图源Watson CL et al., 2015）
六、总结
Chondrex一级代理，博蕾德现货供应
