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人白介素17A ELISA试剂盒
产品简介:

人白介素17A ELISA试剂盒用于体外定量检测人血清,血浆,缓冲液或细胞培养液中的白介素17A。

产品型号:48T/96T/2X96T

更新时间:2024-10-11

厂商性质:代理商

访问量:1057

服务热线

01084640949

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产品介绍

Human IL-17A ELISA Kit

 用途:人IL-17A ELISA试剂盒用于体外定量检测人血清,血浆,缓冲液或细胞培养液中的白介素17A。此试剂盒只用于科研,不能用于诊断。

检测原理:

IL-17A试剂盒应用的是夹心法固相酶联免疫吸附分析法(ELISA)。IL-17A特异单克隆抗体被包被于微孔板上,已知IL-17A浓度的标准品和未知浓度的样品可在此反应孔中进行检测。先将IL-17A抗原和生物素标记IL-17A特异单克隆抗体同时孵育。洗涤后加入亲和素过氧化物酶,孵育后洗去未结合的酶。其后加入底物,产生颜色反应,颜色的深浅与样品中IL-17A的浓度成一定的比例关系。

试剂盒组成及配制:

 

试剂(2-8保存)

1x48孔的配置

产品编号:#850.960.048

 

配制

96T微孔板

1/2

即用型(已包被)

塑料板盖

2


标准品:100pg/ml

1瓶

按瓶上的说明稀释(见试剂制备,)

标准品稀释缓冲液

1瓶(25ml

即用型

生物素标记IL-17A抗体

1瓶(0.4ml)

用生物素标记抗体稀释液稀释(见试剂制备)

生物素标记抗体稀释液

1瓶(7ml)

即用型

亲和素-HRP

2瓶(5ul)

0.5ml HRP稀释液预稀释(见试剂制备,)

HRP稀释液

1瓶(23ml)

即用型

洗涤缓冲液

1瓶(10ml)

200x,蒸馏水稀释(见试剂制备)

TMB

1瓶(11ml)

即用型

H2SO4终止液

1瓶(11ml)

即用型

 

自备材料:

蒸馏水;加样器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩涡振荡器和磁力搅拌器

保存条件:

试剂盒保存于2-8度,

洗涤缓冲液:制备好后,2-8度可保存1周以上

标准品:制备好后即用,不要保存。

生物素标记二抗:制备好后即用,不要保存。

亲和素-HRP: 制备好后即用,不要保存。

样品收集,处理和保存:

1.       细胞培养上清:1000xg离心10分钟去除颗粒和聚合物。

2.       血清——操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

3.       EDTA,柠檬酸盐和肝素血浆可用于检测。1000Xg离心30分钟去除颗粒。

4.       如果样品不直接使用,将其分为小部分(250-500ul-70℃下保存,避免反复冻融。

如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的颗粒,检测前先离心或过滤。

注意:不要在37℃或56℃加热解冻。在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻

检测程序

使用前,将所有试剂充分混合,不要使液体产生泡沫。根据样品数量加上空白,标准品决定所需的板条,每个样品,标准品,空白和质控都应做双份。

详细步骤

1

制备标准曲线

2

按实验方案在对应孔加入100ul标准品和样本,标准品,样本及空白孔均做复孔。

3

用塑料膜封板,室温(18-25.℃)孵育2小时

4

去掉封板膜,按以下程序洗板:

a.  吸出孔内液体。

b.  每孔加入300ul1X的洗涤缓冲液

c.  吸出孔内液体

d.  重复步骤bc两次

5

加入50ul生物标记的IL-17A抗体到各孔

6

用封板膜,封板,室温(18-25.℃)孵育1小时

7

重复步骤4

8

加入100ul亲和素-HRP溶液到各孔

9

用塑料膜封板,室温(18-25.℃)孵育30min

10

重复步骤4

11

加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔

12

室温避光孵育5-15min,用铝箔包住反应板,   避免光照。

13

加入100ul   H2SO4到各孔,终止反应。

在分光光度计中读取结果。450nm作为初始波长,630nm作为参考波长。

结果分析

以吸光度为Y轴,相应的IL-17A标准品浓度为X轴做标准曲线。样品的IL-17A含量可根据其O.D.值由标准曲线推断出来。


更多产品详情,请联系Diaclone 中国区总代理北京博蕾德生物科技有限公司。

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