试剂解析丨血管示踪利器，DyLight™649 标记番茄凝集素

更新时间：2026-10-19

点击次数：6

本文导读

① 说明书速查表　

② 试剂运用：组织化学染色全流程　

③ 糖预吸收阴性对照操作

④ 试剂在文献中的多场景应用

PART

试剂介绍

PRODUCT PROFILE

番茄凝集素是啮齿类动物血管与小胶质细胞的高效标记物，经荧光染料 DyLight™ 649 偶联后，可通过活体血管灌注或直接滴加组织切片实现一步法血管显影；远红光通道适配 GFP、FITC 等黄绿荧光探针，便于双标共定位；常用于肿瘤血管、异种移植瘤新生血管及脑血管示踪研究。

参数速查
项目	参数
名称	DyLight™ 649 标记番茄凝集素（DL-1178-1）
规格	1 mg
试剂浓度	1 mg/mL
储存条件	2–8 ℃ 保存
是否提供 CoA	是，产品详情页可获取
分子量	71
荧光颜色	远红光
消光系数	0.76
最大激发波长	655 nm
最大发射波长	670 nm
配方	10 mM HEPES，0.15 M NaCl，pH 7.5，含 0.08% NaN3，0.1 mM CaCl₂
适用情况	免疫荧光、糖生物学研究
使用参考	推荐使用浓度：520 μg/mL；长期储存如出现沉淀，可 37 ℃ 温浴处理
糖结合特异性	几丁质寡糖、2 型多聚 N-乙酰乳糖胺（type 2 poly-LacNAc）与 2 型双 N-乙酰乳糖胺（Type 2 LacdiNAc）
抑制 / 洗脱糖	几丁质水解物

PART

运用原理

PRINCIPLE

番茄凝集素可特异性识别组织样本糖蛋白上的靶糖链结构，本试剂为 DyLight™ 649 荧光基团直接标记型凝集素，与样本中糖链结合后，可通过荧光显微镜直接成像检测。

图1　Lectin-DyLight-649（红色）标记人和小鼠活体胰腺组织血管内皮

（图源 Mateus Gonçalves L et al., Front Endocrinol, 2021）

PART

相关试剂与材料

REAGENTS & MATERIALS

检测试剂：DyLight™ 649标记番茄凝集素（DL-1178-1）
基础试剂：PBS 缓冲液（10 mM 磷酸钠，150 mM NaCl，pH 7.4）、TPBS 洗涤液（PBS + 0.05% Tween® 20）
封闭试剂：Carbo-Free™ 无多糖蛋白封闭液（SP-5040）
切片前处理：丙酮
封片：抗荧光淬灭封片剂、盖玻片
阴性对照试剂：N-乙酰葡糖胺寡糖（几丁质三糖，LEL 特异性竞争糖）

PART

组织化学染色

STAINING PROTOCOL

Step 1　样本前处理

动物处死前经尾静脉 / 心内注射活体血管灌注 Lectin-DyLight-649，使其随血液循环分布；制备好的冰冻切片风干，染色前用丙酮固定，随后转移至缓冲液中。若样本存在内源性酶活性，采用恰当的方法灭活。

Step 2　封闭

将切片与 Carbo-Free™ 封闭液（SP-5040）在室温下孵育 30 min，封闭非特异性结合，随后吸去多余封闭液。

注意

该试剂为荧光直接标记型，无需进行链霉亲和素 / 生物素封闭。番茄凝集素（LEL）糖特异性为 N-乙酰葡糖胺，推荐使用无糖封闭体系以保证结果可靠性。

Step 3　凝集素孵育与洗涤

用 PBS 缓冲液将 DyLight™ 649标记番茄凝集素稀释至 5~20 μg/mL，滴加至切片，室温孵育 30 min。孵育结束后用 TPBS 洗涤。

Step 4　成像与封片

弃去洗涤液，按需加入核复染试剂，滴加抗荧光淬灭封片剂，加盖盖玻片。使用荧光显微镜、配置 Cy5 / 远红光通道采集图像。

图2　Lectin-DyLight-649（红色）标记小鼠脑组织血管轮廓

（图源 Qiu Y et al., MedComm, 2026）

PART

阴性对照（糖预吸收实验）

NEGATIVE CONTROL

阴性对照用于验证凝集素结合的特异性——凝集素预先使用高亲和特异性糖进行预吸收封闭：

将凝集素稀释至 5~20 μg/mL，体系中加入终浓度 200~500 mM 的特异性竞争糖；
室温预孵育 30~60 min，使游离糖封闭凝集素的糖结合位点；
用预吸收混合液替代正常凝集素工作液，其余孵育、洗涤、检测步骤与实验组一致。

结果判定　若实验组信号在对照组中基本消失，证明结合为糖链特异性结合；若仍有残留信号，提示存在非特异性结合或凝集素次级糖结合活性。

图3　小鼠左心室光片显微镜三维成像像素频率分布图：(a) 阴性对照　(b) Lectin-DyLight-649 标记；

1 背景，2 未标记组织，3 凝集素标记的毛细血管网络

（图源 Nicolas N & Roux E, Biology, 2021）

PART

注意事项

IMPORTANT NOTES

① 封闭液选择：禁止使用含游离糖、糖蛋白的封闭剂（如普通牛奶），避免竞争性结合凝集素导致信号降低。

② 凝集素稀释液现配现用；加入凝集素后的孵育、洗涤、封片、成像操作均需全程避光，防止荧光基团淬灭。

③ 安全提示：DyLight™ 649 标记番茄凝集素（DL-1178-1）实验室操作请佩戴防护手套与护目镜，实验区域保持通风；操作后洗手，实验期间禁止饮食、吸烟。含微量NaN3，废液按实验室化学品规范处理。

PART

研究场景与文献速查

APPLICATIONS & REFERENCES

DL-1178-1 文献应用速查
研究场景	应用方法	文献来源
离体活组织切片	与人胰岛切片共孵育，标记胰岛微血管，共聚焦定量管径	Front. Endocrinol. 2020（DOI 10.3389/FENDO.2020.602519）
全脑微血管 3D	眶后注射 + iDISCO+ 透明 + 光片成像，全脑三维微血管显影	Khouri K et al., Neurophotonics 2021（DOI 10.1117/1.NPh.8.2.025004）
全脑微血管 3D	尾静脉注射标记 Thy1-GFP 小鼠脑血管，双环光片全脑成像	Guo et al., Biomed. Opt. Express 2023（DOI 10.1364/BOE.505217）
心脏 / 冠状血管	眶后 IV 注射，小鼠冠状动脉毛细管网 3D 定量表征	Nicolas & Roux, Biology 2021（DOI 10.3390/biology10040306）
心脏 / 心梗修复	眶后注射 + 经心灌注 + 组织透明，心梗后心脏血管 3D 可视化	Huang et al., Nat. Cardiovasc. Res. 2022（DOI 10.1038/s44161-022-00047-3）
视网膜 / 动静脉畸形	心内注射评估血管灌注，标记 OIR 视网膜动静脉分流	Ouarné et al., Cardiovasc. Res. 2024（DOI 10.1093/cvr/cvae160）

图4　改良 iDISCO+ 透明化后 Lectin-DyLight-649 标记小鼠全脑微血管三维成像

（图源 Khouri K et al., Neurophotonics, 2021）

想要了解 DL-1178-1 更多产品信息？

欢迎咨询博蕾德人工客服

本试剂仅限科研使用，不可用于人或动物的诊断、治疗