一套完整的基于鼠源 IgM 抗‑PEG 抗体的双抗体夹心 ELISA 检测方案，从包被到读数14步一次走通。

上一篇【说明书速查丨IgM型抗PEG抗体】中提及的三株抗体：AGP3、AGP4、rAGP6，可作为 捕获抗体 用于双抗体夹心 ELISA检测中：包被 捕获抗体 抓取样本里的 PEG 链，再用 生物素标记抗 PEG 抗体 结合 PEG 另一表位，链霉亲和素-辣根过氧化物酶显色，OD405 换算 PEG 化分子浓度。

a. 捕获抗体+生物素标记抗体 （见下表）

b. 酶联免疫板

c. 包被缓冲液 

每升含5.3 g 碳酸钠 + 4.2 g 碳酸氢钠，pH 8.0，用 12 mol/L 盐酸调节 pH

d. PBS 缓冲液

0.14 mol/L 氯化钠、2.7 mmol/L KCL、1.5 mmol/L 磷酸二氢钾、8.1 mmol/L 磷酸氢二钠，pH 7.4

e. 封闭液

PBS 配制 5% 脱脂奶粉

f. 样本稀释液

PBS 配制 2% 脱脂奶粉

g. 洗涤缓冲液

PBS + PBS-T（加入 0.05% Tween-20 的 PBS）

❗️ rAGP6-6.3-biotin 方案改用 PBS-C（加入 0.05% CHAPS 的 PBS）❗️

h. 链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）

 I. HRP 显色底物

50 mg/100 mL ABTS，溶于 100 mmol/L 柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 4.0，每升超纯水加入 17.4 g 磷酸氢二钾、21 g 柠檬酸），临使用前，每 10 mL ABTS 底物溶液需加入 3 μL 30% H2O2

❗️rAGP6-6.3-biotin 方案用 2 μL ❗️

表1 anti-PEG™的捕获抗体+生物素标记抗体

表2 操作流程表（点击图片可放大查看）

按文中所提操作执行，包被、洗板、孵育、显色 四步串联可获得稳定的 PEG 化分子定量结果；常规场景建议走两步孵育法，初筛场景用预混一步法提效。