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试剂解析丨Alport综合征研究工具——IV型胶原α2/α5链免疫染色抗体
更新时间：2026-11-05
点击次数：9
文章导读
① 简述GBM的IV型胶原网络构成 与 X连锁Alport综合征的发病机制
② 抗体信息：H25与H53单克隆抗体
③ 冰冻/石蜡两类样本的免疫染色方案，以及肾活检与皮肤活检的结果解读
肾脏肾小球基底膜（GBM）的IV型胶原包含两类组装形式：
形式一
α3、α4、α5 链构成三聚体
[α3(IV)-α4(IV)-α5(IV)]
形式二
α1(IV) 与 α2(IV) 链构成异源三聚体
X染色体编码α5(IV) 链，该基因突变后，会破坏α3-α4-α5网络的组装，导致肾小球基底膜发育异常，引发X连锁Alport综合征(XLAS)。
通过免疫染色检测IV型胶原各条链，结合肾功能、尿蛋白检测，完成Alport综合征的病理诊断。
另外，皮肤表皮基底膜（EBM）同样含有IV型胶原，因此可通过皮肤活检免疫染色检测 α5(IV) 链突变，该法取样创伤小，可作为Alport综合征辅助诊断。
图1 IHC检测X连锁Alport综合征肾小球基底膜IV型胶原α3、α5链
（图源 Lennon et al., Pediatric Nephrology,2022）
双抗体联合 以H25（抗α2(IV)）作为内参对照，以H53（抗α5(IV)）作为诊断靶标，一次免疫染色即可区分X连锁Alport综合征与常染色体隐性Alport综合征。
01
抗体信息
02
免疫染色方案
实际操作根据样本类型调整。
A 冰冻切片样本
切片厚度3μm，室温风干，丙酮固定10min；
0.05M PBS（pH7.4）洗涤玻片5min；
1% 酪蛋白0.05M PBS封闭30min；
用不同的切片分别孵育两抗体1h：以1:25比例稀释（稀释液：1%酪蛋白 0.05M PBS）；
0.05M PBS洗涤10min；
FITC亲和素+（1% 酪蛋白-0.05M PBS）孵育1h；
0.05M PBS洗涤10min；加入含对苯二胺的封片剂（抗荧光淬灭）；
读取染色结果。
图2 肾小球IV型胶原IF染色
（图源 Kim JH., Child Kidney Dis, 2022）
B 石蜡包埋样本
切片厚度3-4μm，脱蜡、复水；
抗原修复二选一：
方案 1
0.2M HCl（pH0.9），小型高压灭菌器 110-127℃ 加热6min；
方案 2
柠檬酸盐缓冲液（pH2.0），微波炉 750W加热8min，随后350W加热 15min。
蒸馏水冲洗玻片2min；
1% 酪蛋白0.05M PBS封闭30min；
用不同的切片分别孵育两抗体1h：以1:50比例稀释（稀释液：1%酪蛋白- 0.05M PBS）；
0.05M PBS洗涤，10min；
FITC亲和素 +（1% 酪蛋白-0.05M PBS）孵育1h；
0.05M PBS洗涤10min；加入含对苯二胺的封片剂；
读取染色结果。
03
染色结果解读
肾活检染色
染色结果可区分 X连锁Alport综合征(XLAS) 和 常染色体隐性Alport综合征(ARAS)。
正常肾脏活检对照
内参对照70751 H25（α2）和诊断靶标70781 H53（α5）都线性染色肾小球基底膜（GBM）、远端肾小管基底膜（dTBM）、鲍曼囊（BC）。
男性 XLAS
H25（α2）染色和正常人一致；H53（α5）基本不染色GBM、dTBM、BC。
女性 XLAS
H25（α2）染色和正常人一致；H53 在 GBM 分布紊乱、染色不连续；dTBM、BC 无染色。
ARAS
H25（α2）染色和正常人一致；H53（α5）在 dTBM、BC 呈马赛克斑驳状染色。
皮肤活检染色（辅助诊断）
所有患者皮肤表皮基底膜（EBM）均可被H25染色；仅正常人EBM可被H53染色；XLAS、ARAS患者皮肤EBM的H53染色为阴性。
抗体染色结果汇总
（+：阳性；+*：斑驳染色；-：阴性）
04
参考文献
Kruegel et al., Nat Rev Nephrol, 2013.
Mahrous NN et al., Encyclopedia, 2023.
Chondrex,Inc Alport 2.0 2020.
本文提及的 IV 型胶原α2(IV)与α5(IV)单抗 均来自 Chondrex
70751 H25
大鼠抗人IV型胶原α2(IV)单克隆抗体，
作为免疫染色内参对照
70781 H53
大鼠抗人IV型胶原α5(IV)单克隆抗体，
作为XLAS诊断靶标
本文涉及试剂仅用于科研，不得用于临床治疗！
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