试剂解析丨高效抑制ELISA样本来源背景噪声——ChonBlock™ELISA Buffer

包被抗原

将抗原用含0.05%NaN3的PBS配制成5-10 µg/mL，向ELISA板每孔加入100 µL 抗原溶液，4°C过夜孵育。

用无内毒素蒸馏水通过多通道洗瓶洗涤3次。微孔板倒扣拍干，切勿使板过度干燥。

加入封闭缓冲液

每孔加入100 µl ChonBlock™，室温孵育1 小时。

制备稀释样本

储备液：取10 µl血清样本，加入990 µL ChonBlock™（1:100稀释）。

稀释样品：根据抗体浓度进一步稀释，例如：200 µl储备液与200 µl ChonBlock™混合（1:200 样本稀释度）。建议：在大规模检测前，先用不同样本稀释度（1:200、1:1000、1:5000）进行预实验，以确定最佳稀释倍数。

洗涤

用洗涤缓冲液（含0.05%Tween-20的PBS）通过多通道洗瓶或自动洗板机洗涤至少 3次，倒扣拍干，切勿使板过度干燥。

加入样品

空白对照孔每孔加入100 μL ChonBlock™；样品孔每孔加入100 μL经ChonBlock™稀释后的待测样品；全部设置复孔，室温孵育2 小时。

洗涤

同步骤 4，至少洗涤3次。

加入检测抗体

取适量过氧化物酶标记检测抗体，用10 mL ChonBlock™稀释。每孔加入100 µL抗体工作液，室温孵育1小时。

建议：用阳性对照进行预实验以优化检测抗体工作浓度。

洗涤

同步骤 4，至少洗涤3次。

加入 TMB显色

TMB溶液现配现用，洗涤后每孔立即加入100 µl TMB，室温孵育10–30分钟。

终止反应

每孔加入50 µl 2mol/L 硫酸终止反应。

读数

在450 nm波长下读取OD值（可用630 nm滤光片作为参比）。