人血小板VASP/P2Y12流式试剂盒

简介：

血管扩张刺激磷蛋白（VASP）是一种重要的细胞内血小板蛋白，基础状态下处于非磷酸化状态。其磷酸化，是受cAMP (环磷酸腺苷) 级联调节。前列腺素E1(PGE1)会激活级联反应，然而这种级联调节通过P2Y12蛋白受体被ADP抑制。

在检测时，VASP的磷酸化与P2Y12受体抑制效应密切相关，而VASP的非磷酸化状态与P2Y12 受体激活相关。

噻氯匹定和氯吡格雷对血小板受体的抑制作用是不可逆的。这种效应通过PGE1的激活，同时ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被证实。

本试剂盒利用双色流式细胞测定术，通过VASP的磷酸化状态的测定，从而检测P2Y12受体活性。

方法：

先将全血单独与PGE1孵育或与PGE1+ADP混合孵育。细胞渗透后，处于磷酸化状态的VASP通过间接免疫荧光反应特异性的被单克隆抗体标记。使用双色流式细胞分析测定单独PGE1激活的和PGE1联合ADP处理管的校准平均荧光强度（mean fluorescence intensities,MF1），经减去空白对照得到校正后的MFIc，即减去阴性对照之后的平均荧光强度。再计算血小板反应指数（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，评估标本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。

注意事项

  1）溶血样本不适于检测。

  2）红细胞计数显著低于参考水平的标本不适用。

3）有些标本由于一些红细胞溶解不完整而不适于加入2ml Reagent 1后立即分析，否则出现血小板与红细胞群的交叉。为了保证红细胞溶解完整，应在混匀试管前在室温放置5min，然后进行流式细胞分析。

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