DirectPCR Lysis Reagent (Cell)
DirectPCR Lysis细胞直接PCR裂解液
【单瓶试剂，细胞裂解+PCR一步到位】

DirectPCR Lysis Reagent (Cell)

细胞直接PCR裂解液 裂解+PCR一步到位

           Cat#301-C/302-C

产品关键词：

Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；301-C/ 302-C；

产品介绍：

Viagen DirectPCR® DNA提取系统是一种单管式快速DNA制备系统，适用于小鼠尾组织、耳组织、卵黄囊及培养细胞。该技术采用Viagen Biotech Inc.科学家研发的组分，确保提取的DNA可直接用于基因组PCR分型。动物组织与细胞中的某些成分会抑制PCR反应。DirectPCR裂解试剂含有特异性抑制因子，可中和此类PCR抑制物。因此，经DirectPCR试剂释放的DNA可直接用于一步法PCR基因分型。DirectPCR试剂不仅能介导生物样本的快速裂解，其抑制因子还可有效中和粗提液对PCR扩增的抑制活性，同时最大限度保持释放的基因组DNA完整性。该裂解液简易操作流程避免了溶液转移或开管步骤，为您节省大量额外时间。

产品特点：

与传统方法相比，DirectPCR®系统具有以下显著优势：

· 省时：操作时间更短，粗提裂解液可直接用于PCR

· 经济：性价比高

· 安全：不含有机试剂

· 环保：减少废弃物产生（有机试剂、离心管、枪头等）

· 稳定高效：成功率近100%，且DNA得率高

操作流程：（细胞直接PCR裂解液）

1.   将10cm培养板中的细胞悬浮于200-300µl DirectPCR裂解试剂（细胞）中，试剂需含有新鲜配制的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K（Sigma，产品编号p6556，不包含）。蛋白酶K在DirectPCR试剂中可稳定存在约24小时。如果处理的细胞数量较少，难以称量蛋白酶K干粉，可使用基因组PCR级蛋白酶K溶液（Viagen Cat#501-PK），浓度为0.5-1.0 mg/ml（每1 ml DirectPCR试剂加入25-50µl蛋白酶K溶液）。

注意：对于少量细胞，可将DirectPCR试剂用蒸馏水稀释至多10倍，然后按比例增加裂解液体积用于PCR（见表1）。

2.   将试管置于55℃的旋转杂交炉中旋转5-6小时，直至无团块可见。如有需要，可旋转过夜，效果不会降低。充分裂解非常重要。为获得可重复的结果，建议在2-3小时后摇动装有试管的瓶子，重新调整试管位置。

注意：旋转杂交炉的效果优于摇板。对于少于150 µl DirectPCR试剂（细胞）的情况，使用0.75 cm试管。长时间旋转导致的DNA断裂不会显著影响PCR效果。对于不同大小的样本，按比例使用DirectPCR裂解试剂。

3.   将粗裂解液在85°C水浴中孵育45分钟，将整个试管架漂浮于水浴上。（可选）在步骤4之前，离心10秒以沉淀杂质。粗裂解液可在-20℃保存1年（或在4℃保存1周），效果不会降低。

4.   每50 µl PCR反应使用0.5-1µl裂解液。推荐使用Eppendorf Hotmaster Taq聚合酶（cat#954-14-5018）、Sigma JumpStart Taq DNA聚合酶（产品编号D9307）或Qiagen HotStar Taq DNA聚合酶（产品编号203203）进行PCR。

DNA回收：粗裂解液中的DNA可回收用于进一步分析。加入NaCl至终浓度为250 mM，然后加入0.7体积的异丙醇。DNA将形成沉淀。4℃离心2分钟，弃上清，用1 ml 70%乙醇洗涤DNA，溶解于50µl 10mM Tris-HCl（8.0）中。取1µl用于PCR。

表1. 培养的哺乳动物细胞建议起始裂解条件

^*使用旋转杂交炉裂解。** 使用摇板裂解。用磷酸盐缓冲液洗涤96孔板中的细胞两次，加入60µl 2倍稀释的DirectPCR试剂（细胞）。55℃孵育过夜。将96孔板置于湿盒中，漂浮于85℃水浴上1.5小时。多次吸打混匀。取1ul裂解液用于PCR。

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